让您在实验中提高ELISA试剂盒灵敏度的方法

让您在实验中提高elisa试剂盒灵敏度的方法
1、包被液稀释的抗原（4、8、16、32、64、128ng/ml），用移液器小心将抗原液100μl加在elisa板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可产生气泡。每个浓度加4孔（4个复孔），对照孔4孔加入相同体积的包被液；其中两孔加入100μl样本。用保鲜膜包好酶标板，将酶标板放入底部垫有湿砂布的铝盒中，放入4℃中包被过夜。
2、洗涤：将酶标板孔中的包被液倾干净，并反扣在干净的吸水纸上拍干，加入洗涤液洗涤进行洗涤。采用浸泡式洗涤法，将洗涤液注满板孔，放置3min，间歇摇动，浸泡时间不随意缩短，吸干孔内洗涤液，也可甩去洗涤液，反扣在吸水纸上拍干。重复洗涤4次。
3、封闭：在酶标板孔的底部加入封闭液200μl，室温下封闭1h。
4、1h后将酶标板孔中的封闭液倾倒干净，并反扣在干净的吸水纸上拍干，然后每孔中加入一抗使用液100μl，注意将抗体液加在酶标板孔的底部，避免加在孔壁上部。用保鲜膜包好酶标板，将酶标板放入底部垫有湿砂布的铝盒中，并在铝盒中放一装有少量水的烧杯，在37℃温箱中放置2h。
5、2h后取出酶标板，倾倒干净酶标板孔中的一抗溶液，并反扣在干净的吸水纸上拍干。洗涤4次，洗涤方法同2。
6、在酶标板孔中加入梅标二抗1:4000倍稀释的溶液100μl，加在elisa板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可产生气泡。用保鲜膜包好酶标板，将其放入底部垫有湿砂布的铝盒中，并在铝盒中放一装有少量水的烧杯，在37℃温箱中放置1h。
7、取出酶标板，倾倒干净孔中的二抗溶液，并反扣在干净的吸水纸上拍干，按2洗涤方法洗涤4次。
8、在酶标板每孔中加入底物a液50μl，底物b液50μl，反应15min～20min后，在每孔中加入反应中止液50μl，在中止反应后15min时在酶标仪上于450nm处测定od值。

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