兔子白介素3（IL-3）ELISA试剂盒操作步骤及注意事项
兔子白介素3(il-3)elisa试剂盒操作步骤及注意事项
操作步骤：
1、待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。
2、酶标板置4℃，包被过夜。
3、洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后，即甩去)，之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
4、阴性对照孔每孔加入pbs 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl。
5、酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
6、洗板，同(4)。
7、每孔加1:5000稀释的hrp-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
8、酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
9、洗板，同(4)。
10、每孔加tmb显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。
11、每孔加100μl 2mol/l h2so4终止反应。
12、分别测450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，zui终测得的od值为两者之差(w1-w2)，以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
13、数据处理：在得出标本(s)和阴性对照(n)的 od值后，计算s/n值。s/n≥2.1为阳性判定标准。
注意事项：
1、在收集标本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。
2、建议新鲜标本收集后尽早检测。1-3天左右检测的样本可储存在4℃备用。如有特殊原因需要周期性收集标本，请将标本及时分装后放在-20℃或- 70℃条件下保存，避免反复冻融。
3、当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
4、洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
5、一次加样时间zui好控制在5分钟内。
6、请每次测定的同时做标准曲线，zui好做复孔。
7、如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数。
8、在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
9、底物请避光保存。
10、不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
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1、待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。
2、酶标板置4℃，包被过夜。
3、洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后，即甩去)，之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
4、阴性对照孔每孔加入pbs 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl。
5、酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
6、洗板，同(4)。
7、每孔加1:5000稀释的hrp-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
8、酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
9、洗板，同(4)。
10、每孔加tmb显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。
11、每孔加100μl 2mol/l h2so4终止反应。
12、分别测450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，zui终测得的od值为两者之差(w1-w2)，以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
13、数据处理：在得出标本(s)和阴性对照(n)的 od值后，计算s/n值。s/n≥2.1为阳性判定标准。
注意事项：
1、在收集标本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。
2、建议新鲜标本收集后尽早检测。1-3天左右检测的样本可储存在4℃备用。如有特殊原因需要周期性收集标本，请将标本及时分装后放在-20℃或- 70℃条件下保存，避免反复冻融。
3、当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
4、洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
5、一次加样时间zui好控制在5分钟内。
6、请每次测定的同时做标准曲线，zui好做复孔。
7、如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数。
8、在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
9、底物请避光保存。
10、不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
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