操作实验细菌转化的步骤是怎样的呢?

一、原理
质粒dna粘附在细菌细胞表面，经过42°c短时间的热击处理，促进吸收dna.然后在非选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中生长。
二、器材
旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，干式恒温气浴（或恒温水浴锅），制冰机，恒温摇床，培养皿（已铺好固体lb-amp），超净工作台，酒精灯，玻璃涂棒，恒温培养箱。
三、试剂
培养基（不加抗菌素），lb培养基（加抗菌素），无菌ddh2o,iptg,x-gal.
四、实验准备
无菌ddh2o，1.5ml离心管装入铝制饭盒（灭菌）、移液器吸头装入相应的吸头盒（灭菌），20%iptg（m/v），2% x-gal（m/v，用n,n-二甲基甲酰胺配）。
五、操作步骤
（1）事先将恒温水浴的温度调到42℃。
（2）从-70℃ 超低温冰柜中取出一管（100μl）感受态菌，立即用手指加温融化后插入冰上，冰浴5~10min。
（3） 加入5μl连接好的质粒混合液（dna含量不超过100ng），轻轻震荡后放置冰上20min。
（4） 轻轻摇匀后插入42℃水浴中1~2min进行热休克，然后迅速放回冰中，静置3~5min。
（5） 在超净工作台中向上述各管中分别加入500μl lb培养基（不含抗菌素）轻轻混匀，然后固定到摇床的弹簧架上37℃震荡1h.
（6） 在超净工作台中取上述转化混合液100~300μl，分别滴到含合适抗菌素的固体lb平板培养皿中，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀（注意：玻璃涂布棒上的酒精熄灭后稍等片刻，待其冷却后再涂）。
（7） 如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加40μl 2% x-gal，8μl 20% iptg，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。
（8） 在涂好的培养皿上做上标记，先放置在37℃恒温培养箱中30-60min直到表面的液体都渗透到培养基里后，再倒置过来放入37℃恒温培养箱过夜。
（9） 在被细菌污染的桌面上喷洒70%乙醇，擦干桌面，写实验报告。
（10）观察平板上长出的菌落克隆，以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。
（来源：北京杰辉博高生物技术有限公司）

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